小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）分离自骨髓。在骨髓中，BMSC占骨髓有核细胞总数的0.001%-0.1%，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。
目前用于分离BMSCs的方法主要有五种，分别是贴壁筛选法、骨组织消化法、密度梯度离心法、免疫磁珠分选法和流式细胞仪分离法。
密度梯度离心法是针对骨髓中不同细胞的大小和密度差异进行分选，骨髓细胞悬液加入到密度梯度离心液上面，通过离心使得不同类型细胞沉降至其等密度点，然后吸取特定位置富集的细胞。
常见的梯度离心液有Ficoll、Ficoll-Paque、percoll、Lymphopre等，具有低粘性和低渗透性的特性，使用密度约为1.077g/mL。
在离心分层时，红细胞及多核细胞因比重（1.080g/mL）较大而沉降于底部，其次是单个核细胞（包括BMSCs、造血干细胞、单核细胞等），悬浮密度位于（1.056~1.075）g/mL，血浆及其溶解物悬浮密度位于1.050g/mL。位于分离液之上的灰白色云雾状层即为单个核细胞层，在获取该层细胞后再通过差速贴壁法去除未贴壁细胞。
使用密度梯度离心法分离小鼠骨髓间充质干细胞效果好，但操作严格，不易掌握。
更新时间：2022-11-17
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